Способ оценки эффективности вакцинации против коклюша, дифтерии и столбняка
Изобретение относится к медицине, а именно иммунологии, и может быть использовано для оценки эффективности вакцинации против коклюша, дифтерии и столбняка. Способ заключается в полуколичественном определении напряженности поствакцинального иммунитета к антигенам возбудителей коклюша, дифтерии и столбняка. Для этого твердую фазу, представляющую собой тест-полоски из нитроцеллюлозной мембраны с диаметром пор 0,45 мкм и размером 0,5×2 см, сенсибилизируют путем нанесения дифтерийного 3,5 мкл с концентрацией 0,1 мг/мл и столбнячного 3,5 мкл с концентрацией 0,05 мг/мл анатоксинов, цельноклеточного коклюшного антигена 3,5 мкл, 20 МОЕ, а также 3,5 мкл раствора IgG мыши с концентрацией 0,1 мг/мл в качестве положительного контроля. После подсушивания тест-полосок, инкубации их с блокирующим раствором ЗФРТ в лунках планшета, размещенного на шейкере в термостате при температуре +37°С в течение 60 мин, после чего твердую фазу трехкратно по 5 минут отмывают ЗФРТ, инкубируют с тестируемыми образцами сыворотки крови и контрольными образцами сывороток в течение 30 минут при температуре 37°С. Вновь отмывают и «проявляют» антитела, связавшиеся с твердой фазой, при помощи диагностикума, представляющего собой конъюгат углеродных наночастиц с G белком стрептококка в разведении 1/45 в течение 60 минут. Оценивают результат при помощи программы для анализа сканированных изображений после сканирования тест-полосок в обычном планшетном сканере. При содержании противостолбнячных и противодифтерийных антител менее 0,1 МЕ/мл оценивают недостаточную защиту, при которой требуется иммунизация. При 0,1-1,0 МЕ/мл - достаточный уровень защиты, при которой необходима бустерная доза вакцины, а при значениях более 1,0 МЕ/мл - как высокий уровень защиты, и иммунизация необходима через 5 лет и более. Наличие протективного титра противококлюшных антител оценивают, рассчитывая пороговое значение: Х=0,128(А-В)+В, где X - пороговое значение оптической плотности, А - оптическая плотность сильно положительного образца, В - оптическая плотность слабоположительного образца, и если полученное значение оптической плотности образца выше порогового значения, то он содержит защитный уровень противококлюшных антител. Использование данного способа позволяет с помощью тест-системы полуколичественно оценивать наличие защитного поствакцинального иммунитета одновременно к трем инфекциям: коклюшу, дифтерии и столбняку. 2 табл., 2 пр.
